液氮凍存管操作指南：從分裝到存儲(chǔ)的完整流程解析

　　天津本生液氮凍存管操作全流程指南

　　一、?前期準(zhǔn)備?

　　凍存管選擇?

　　優(yōu)先選用聚丙烯(PP)材質(zhì)內(nèi)旋蓋凍存管，耐-196℃低溫且密封性強(qiáng)。

　　容量建議1.5-2.0mL，分裝時(shí)保留10%-20%空間防凍脹破裂。

　　樣本處理?

　　細(xì)胞樣本需調(diào)整至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(活力>95%)，與凍存液(如10% DMSO+90% FBS)混合均勻。

　　菌種樣本需與保護(hù)劑(如10%甘油)配制成懸液，濃度控制在10?-101?個(gè)/mL。

　　二、?分裝與標(biāo)記?

　　無菌分裝?

　　在超凈臺(tái)中操作，避免污染;分裝后立即擰緊管蓋，確保密封性。

　　信息標(biāo)記?

　　使用激光雕刻或耐低溫標(biāo)簽，標(biāo)注樣本名稱、日期、操作者等關(guān)鍵信息。

　　三、?程序降溫?

　　梯度冷凍?(推薦)

　　4℃平衡30分鐘 → -20℃保持2小時(shí) → -80℃預(yù)冷4小時(shí) → 轉(zhuǎn)移至液氮?dú)庀鄥^(qū)(-150℃)過渡1小時(shí)。

　　快速冷凍?

　　使用程序降溫盒(如Mr. Frosty)，以-1℃/min速率直接降至-80℃。

　　四、?液氮存儲(chǔ)規(guī)范?

　　存儲(chǔ)模式?

　　氣相存儲(chǔ)?(-150℃~-190℃)：適合頻繁存取，溫度波動(dòng)小。

　　液相存儲(chǔ)?(-196℃)：長(zhǎng)期保存選擇，需嚴(yán)格密封防液氮滲入。

　　安全措施?

　　凍存管需裝入凍存盒或紗布袋，避免直接接觸液氮。

　　液氮罐需定期檢查液位(保持≥1/3容量)。

　　五、?復(fù)蘇操作?

　　快速解凍?

　　從液氮中取出后立即置入37℃水浴，輕柔搖動(dòng)1-2分鐘至融化。

　　離心去保護(hù)劑?

　　將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管，加入培養(yǎng)基離心后棄上清，重懸接種。

　　六、?風(fēng)險(xiǎn)控制?

　　防爆管?：選用高質(zhì)量?jī)?nèi)旋蓋凍存管，避免直接浸入液相液氮。

　　防護(hù)裝備?：操作時(shí)穿戴低溫手套、護(hù)目鏡，防止凍傷或爆管傷害。

　　(注：長(zhǎng)期存儲(chǔ)樣本建議每5年檢測(cè)活性。)

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