天津本生—DMEM(低糖)的注意事項(xiàng)和使用步驟

　　DMEM培養(yǎng)基是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基，是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。

　　與MEM比較增加了各種成分的用量，同時又分為高糖型(低于4500gm/L)和低糖型(低于1000mg/L)。

　　DMEM低糖培養(yǎng)基用于養(yǎng)干細(xì)胞可防分化，DMEM高糖可養(yǎng)大多數(shù)哺乳動物的細(xì)胞。

　　注意事項(xiàng)：

　　1、培養(yǎng)及長期放置，需要2-8℃避光保存，請勿低溫凍存。

　　2、培養(yǎng)基中添加的L-谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定、易分解，長期放置后使用若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長變慢可以在使用前加入適量的L-谷氨酰胺，來維持細(xì)胞正常代謝。

　　3、含有NaHCO3的培養(yǎng)基開瓶次數(shù)較多后培養(yǎng)基內(nèi)的CO2會逐漸溢出，PH值上升，培養(yǎng)基的顏色會偏紫色。

　　培養(yǎng)基偏堿性會造成細(xì)胞生長停滯或死亡，建議分裝成小瓶使用或用HEPES調(diào)整至正常PH范圍。

　　　DMEM(低糖)使用步驟：

　　1、準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同菌類的用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

　　2、校正PH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線、加熱溶解、補(bǔ)充水分、測定酸堿度，常用PH6.8-8.0的精密試紙或酸度計(jì)測定。

　　用1NNaOH和1NHCI調(diào)節(jié)PH值到適宜范圍內(nèi)。

　　3、過濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用DMEM低糖紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。

　　4、分裝：將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)，塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。

　　5、滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。

　　一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽孢有較強(qiáng)的抗熱性，需經(jīng)高壓蒸氣滅菌才能達(dá)到滅菌的目的。

　　根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。

　　因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。

　　而在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。

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